TurboTEV蛋白酶是经过增强的烟草蚀刻病毒（TEV）N1a蛋白催化片段，属于半胱氨酸蛋白酶，能够特异性地识别Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly的切割位点，并在Gln和Gly之间进行切割。该蛋白酶是一种高效且稳定的限制性蛋白酶，其活性在4°C下表现尤为突出，无需任何特殊的缓冲液，适合在目标蛋白最适宜的缓冲液中使用。

TurboTEV蛋白酶的分子量为52kDa，带有GST和His标签，易于通过Ni螯合亲和树脂或谷胱甘肽（GSH）树脂与剪切标签一同去除。一方面，其来源于大肠杆菌，且活性超过10 Units/µg。1单位TurboTEV蛋白酶在30°C下能在1小时内裂解3µg对照底物的85%。

尊龙凯时提供高效的TurboTEV蛋白酶，使得蛋白质的裂解、融合标签的去除，以及蛋白质和肽的纯化变得更加简单有效。

Protocol

1. 在溶液中裂解：

A. 配制新鲜的冰冷透析缓冲液。例如：25mM Tris-HCl, pH 8.0, 150-500mM NaCl, 14mM β-巯基乙醇。

B. 稀释目标蛋白样品池：

(a) 使用透析缓冲液将目标蛋白样品稀释至1-2 mg/mL。如果目标蛋白在透析缓冲液中聚集，此步骤可以选择不进行。

(b) 留出一小部分未切割样品以备分析。如果目标蛋白样品池来自镍柱洗脱，并且对EDTA兼容，可以加入EDTA，最终浓度为0.5mM。

C. 按照目标蛋白与TurboTEV蛋白酶1:100（w/w）的比例加入TurboTEV蛋白酶，即100mg目标蛋白对应10000 Units (1mg) TurboTEV蛋白酶。

D. 在4℃下，用透析缓冲液透析过夜（约16小时）。

2. 去除TurboTEV蛋白酶：

A. 上柱。

B. SDS-PAGE分析（可选）。

产品应用：

• 蛋白裂解功能；
• 从重组蛋白中去除融合标签；
• 蛋白质和肽的纯化。

常见FAQ

1. 问：TEV消化反应中的缓冲液条件有多重要？这些条件是否会对TurboTEV的剪切效率产生不利影响？

答：每种成分均有影响：1mM DTT可以使用，10%甘油、20mM组氨酸、500mM NaCl和100mM Tris不推荐使用，β-巯基乙醇可以根据具体需要加入。

2. 问：在剪切之前是否需要缓冲液交换蛋白质？

答：这可能是必要的。

尊龙凯时自2003年在美国圣地亚哥成立以来，一直致力于为生物研究领域提供优质产品和服务，涵盖免疫学、细胞生物学、分子生物学等多个领域，包括代谢检测试剂盒、ELISA试剂盒、生化试剂、抗生素、核酸酶、蛋白酶/蛋白激酶及引物等。我们的产品和服务将助力您的研究进展。