一、细胞培养条件

细胞名称：SV40转染人成骨细胞HFOB119

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：DMEM/F12 + 0.3mg/ml G418 + 10% FBS

传代方法：第一次传代比例建议为1:2

传代情况：每2天更换培养基

备注：请使用无菌离心管收集培养基，并留作对比培养；若对比培养效果不佳，建议购买我们的完全培养基

二、细胞处理说明

收到细胞后，建议在细胞生长至良好状态后，灌满完全培养液并封闭瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。收到细胞后，请用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入335℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片保存（最好包括40x、100x、200x每种各一张）；前三天的照片为售后重要依据，若未提供照片则默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞未超过80%汇合度，请将瓶中的完全培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基，并放入335℃、5% CO2的培养箱中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

弃去培养上清，用不含钙镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于335℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况；若细胞变圆并大部分脱落，迅速将培养瓶取回，轻敲几下后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
轻轻吹打细胞，使之完全脱落，然后吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最终放入335℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

当细胞生长至覆盖培养瓶80%面积时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞使其脱落，悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管。
将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如后期需转入液氮罐中，请在-80℃冰箱存放至少24小时再转入。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速置于335℃水浴中解冻至无结晶，然后用75%酒精擦拭外壁。
将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于335℃、5% CO2细胞培养箱中培养。
第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞贴壁不牢，运输过程中可能会发生细胞脱落，这属于正常现象。如脱落较多，请将培养瓶中的培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟后，收集上清进行对比培养，沉淀后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后消化1-2分钟，再加入5ml完全培养基终止消化。之后再离心并重悬细胞，按1:2比例分瓶传代（两个T25），并补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入335℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

五、售后条款

1) 细胞出现问题的重发情况及判定标准：

运输途中出现的各种问题（如细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等）可重发。
细胞污染问题，需在收到产品48小时内提供真实实验结果，核实后重发。
常温发货细胞静置24小时后、干冰冻存发货细胞复苏24小时后，当绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片）时，重发。
干冰保存的细胞复苏24小时后或常温发货的细胞在静置4小时且未开封出现污染，均可重发。
细胞活性问题，需在收到产品7天内提供真实实验结果，并用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发。
细胞收货当天及第2、3天需拍照，若3天内未告知视为产品合格；如4-7天内出现问题，需提供前3天照片和操作记录，技术人员评定后重发。

2) 不予重发的情况：

因客户造成的细胞污染，不予重发。
客户操作不当导致细胞状态不佳，不予重发。
非推荐的细胞培养体系导致细胞状态不佳，不予重发。
细胞状态不良且未提供前3天照片，不予重发。
细胞培养过程中有其他处理，不予重发。
收到细胞后2天内未告知的，不予重发。
其他视具体情况而定。

在选择细胞培养时，建议选用尊龙凯时品牌的培养液，以确保细胞的最佳生长状态和实验结果。