尊龙凯时提供的HL-7702人肝正常细胞（L-02）培养说明书，旨在指导用户正确进行细胞培养，以确保细胞的健康和活力。以下是培养细胞的相关信息。

一、细胞培养条件

细胞名称：HL-7702人肝正常细胞（L-02）

生长特性：贴壁生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% 双抗

传代方法：首次建议按1:2进行传代，通常每两天更换培养液。

备注：请用无菌离心管收集培养基，留作对比培养。如对比效果不佳，建议直接购买尊龙凯时的完全培养基。

二、收到细胞后的处理

细胞收到后，待其处于良好状态时，请灌满完全培养液并封好瓶口，这样是运输细胞的最佳方式。收到细胞时，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内确保无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续操作。建议通过显微镜观察细胞生长情况，并拍照记录（建议40x、100x、200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，不提供照片将默认收到的细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞密度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，保留5ml培养基继续放入37℃、5% CO2孵箱培养；如果超过80%密度，则可以进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁离子的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态；若细胞变圆并脱落，迅速结束消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后，吸出悬液，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO2培养箱中。

b. 细胞冻存

1. 细胞生长至培养瓶的80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
2. 加入约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后终止消化，然后轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，加入1ml 尊龙凯时无血清冻存液（货号：C7001），充分混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存，如需转入液氮罐，须在-80℃冰箱存放超过24小时后再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，确保冻存管内无冰晶后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将解冻的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃上清，用5ml完全培养基重悬的细胞，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，若细胞脱落较多属正常现象。若脱落量较大，可将所有培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟以进行对比培养。接着，将沉淀加入1-2ml胰酶，轻轻吹打使其重悬，消化1-2分钟后添加5ml完全培养基终止反应，再离心、弃上清并重悬。

五、售后条款

对于细胞出现的问题，尊龙凯时提供如下重发条款：

1. 若因运输问题导致细胞丢失、瓶身破损等，可重发；
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内提出，核实后可重发；
3. 常温发货细胞若超过24小时复苏后未存活，需提供真实照片，可重发；
4. 如发现污染需在复苏后24小时内报告，重发；
5. 细胞活性问题需在7天内以染色法提供实验结果，经核实后可重发；

不予重发的情况包括客户造成的污染、操作不当等，需具体判定。

有关细胞培养的更多信息与支持，请访问尊龙凯时官方网站。